在國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，zui讓大家關(guān)注的往往是一些操作技巧、步驟、保存、注意事項(xiàng)，其實(shí)只要這些方面做好了之后基本就沒有什么問題了。但是也有客戶反映，為什么我每一步都按照要求去做還是沒有做好呢？這就很可能是操作細(xì)節(jié)的問題了。大家整理出一份ELISA實(shí)驗(yàn)的細(xì)節(jié)優(yōu)化方案，這些ELISA優(yōu)化是否在您的重點(diǎn)思慮范圍之內(nèi)呢？
一、包被原的性質(zhì)
1.親和素生物素：先親和素先包被載體，加入生物素化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。
2.脂類物質(zhì)：可將其在有機(jī)溶劑中溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面。
3.小分子必須依靠和大的蛋白載體偶聯(lián)后才能固定在固相載體上。
二、包被液的選擇
一般選擇ph9.6的碳酸鹽緩沖液。但有時(shí)由于試驗(yàn)的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來(lái)包。上海恒遠(yuǎn)提醒應(yīng)當(dāng)注意，由于蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用，這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。具體的試驗(yàn)還要有堅(jiān)固的理論外也要實(shí)踐，看一下zui終可不可以應(yīng)用到自己試驗(yàn)當(dāng)中去。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩沖液，還有pH7.2的磷酸鹽緩沖液和pH7-8的Tris-HCL緩沖液等等。
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